大肠杆菌作为生物医疗领域中应用广泛的工程菌，凭借其快速的生长速度和低廉的培养成本，成为基因克隆和表达系统的理想选择。这种细菌的质粒在基因工程中经常被用作载体，广泛应用于分子克隆、疫苗研发以及重组蛋白类药物的生产。然而，在这些生物制品中，内毒素的残留水平需要严格控制。

内毒素简介

内毒素是存在于革兰氏阴性菌细胞壁最外层的成分，主要由磷脂-多糖-蛋白质复合物构成。其最主要的毒性成分是脂多糖(LPS)中的类脂A，内毒素只有在细菌死亡或被破坏后才会释放。内毒素一旦进入人体，可通过与宿主细胞中的Toll样受体（TLR）结合，引发一系列炎症反应，导致发热、全身炎症反应，甚至引起休克和多脏器功能衰竭，因此被称为“热原”。内毒素的强生物活性意味著即使是微量也能引发明显的炎症与免疫反应。此外，内毒素具有优越的耐热性和稳定性，常规的化学药品难以影响其活性，只有强酸、强碱或强氧化剂能够破坏其结构。

内毒素的检测方法

针对内毒素的检测已开发多种方法，主要包括凝胶法、重组C因子法和动态比浊法等。凝胶法利用鲎试剂中的C因子，这是一种对内毒素敏感的蛋白，通过与内毒素结合并激活反应，生成凝集素形成的沉淀。该方法简便易操作，但存在检测范围的限制。随着对鲎的保护和重组技术的发展，新一代的人工合成重组C因子被广泛应用于内毒素检测中，能够产生荧光信号，信号强度与内毒素浓度呈正比，具备高特异性，可有效检测含有β-葡萄糖干扰的样品。动态比浊法则通过光学仪器测定反应混合物的浑浊度变化，不仅有助于追踪产品质量，还能提供风险预警。

内毒素的去除方法

由于内毒素的显著危害性，FDA及其他法规对其控制提出了明确要求。要从源头消除外源性内毒素污染，确保与样品直接接触的设备、容器和材料经过严格消毒处理。同时，对于样品中可能存在的内源性内毒素污染，需要采取相应的去除措施，包括离子交换层析法、疏水层析法和特异性吸附法等。

离子交换层析法可利用内毒素与目标产品在缓冲液中带电性质的差异，进行有效去除。阴离子交换主要通过改变缓冲液的离子强度，使内毒素带上大量负电荷，以便与正电荷配基结合，而阳离子交换则通过改变pH使带正电的目标蛋白吸附在介质上，进而实现分离。疏水层析法则利用内毒素在高盐条件下聚集成不与疏水填料结合的复合物，而使目标样品得以流出。此外，通过将多粘菌素B偶联于层析介质上，实现内毒素的特异性吸附，以有效去除内毒素，同时最大限度减少对目标蛋白的损失。

内毒素的去除不仅对生物药物的质量控制至关重要，更是确保患者安全的核心环节，尊龙凯时始终秉持严格的质量管理体系，致力于在生物医疗领域为客户提供高标准的产品与服务，确保内毒素控制的有效性与可靠性。