——基于南京赛泓瑞生物科技有限公司的技术方案与数据验证

1. 细胞构建与培养体系优化

HCT15/FU细胞株是通过长期低剂量顺铂（Cisplatin）暴露，诱导人结直肠腺癌细胞HCT-15形成耐药性，从而构建而成，表现出稳定的耐药表型。其技术方案具体包括：

耐药诱导流程：吸纳梯度浓度递增法（初始浓度0.5μM，逐步提升至5μM），结合间歇性药物刺激，持续培养超过6个月，以筛选稳定的耐药性细胞株。

培养基配置：采用RPMI-1640基础培养基，加10%胎牛血清（FBS）、1%双抗（青霉素-链霉素）及维持浓度顺铂（2μM），确保耐药表型的稳定性。

质量控制：通过STR鉴定确保细胞株的遗传一致性，支原体检测结果阴性，冻存液使用无血清配方（90% FBS + 10% DMSO），并在液氮中长期保存。

2. 耐药性验证技术

IC50测定：采用CCK-8法检测顺铂对HCT15/FU的半数抑制浓度（IC50），结果显示耐药株的IC50为152μM，显著高于亲本细胞的28μM（*p<0.01）9。

多药耐药基因分析：qPCR检测表明，耐药株中的ABC转运蛋白家族（如ABCB1、ABCC1）及抗凋亡基因（Bcl-2）的表达上调，这与临床耐药机制相一致。

案例名称：新型纳米载药系统逆转HCT15/FU顺铂耐药性研究

实验设计背景：针对HCT15/FU耐药性强、化疗效果差的问题，开发聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）纳米颗粒负载顺铂（PLGA-Cis），评估其逆转耐药效果。实验分组如下：

对照组：常规顺铂处理（5μM）；实验组：PLGA-Cis处理（等效顺铂浓度5μM）；空白组：无药物处理。

关键数据与结果：

细胞活力：PLGA-Cis组细胞存活率较对照组下降42%（*p<0.05），表明纳米载药系统增强了药物的内吞效率9。

凋亡率：通过Annexin V/PI双染，实验组的凋亡率提升至58.3%，显著高于对照组的22.1%（*p<0.01）。

耐药基因表达：Western blot结果显示，PLGA-Cis处理后，ABCG2蛋白表达下调45%，Bcl-2下调60%，提示该纳米药物可靶向逆转耐药通路。

3. 技术优势及数据支持

实验全程使用南京赛泓瑞提供的HCT15/FU细胞株，其稳定的耐药表型为研究提供可靠的模型。

可重复性：STR鉴定结果与文献报道一致，确保了实验的一致性（如D5S818位点：13；D13S317位点：8,11）。

抗肿瘤药物筛选平台：HCT15/FU细胞株适用于高通量筛选逆转耐药性的候选化合物。例如，南京赛泓瑞合作实验室成功筛选出天然产物黄芩素（Baicalein），其联合顺铂可降低IC50至68μM，协同指数（CI）为0.7819。

耐药机制研究：通过CRISPR-Cas9敲除ABCB1基因，验证其在耐药性中的关键作用。数据表明，敲除后细胞对顺铂的敏感性提升了32倍，为靶向治疗提供依据。

结合患者来源异种移植（PDX）模型，HCT15/FU细胞可用于模拟临床耐药复发场景，优化个体化用药方案。

耐药机制研究显示Wang等（2020）通过miRNA测序发现HCT15/FU中miR-1323p显著下调，靶向调控PI3K/AKT通路，为耐药干预提供新靶点。

临床相关性验证：STR位点分析表明HCT15/FU与临床结直肠癌样本遗传特征高度匹配（如D18S51位点：11,17），支持其在转化医学中的应用价值。

南京赛泓瑞生物科技有限公司提供：配套试剂：定制化培养基（含梯度顺铂浓度）、冻存液及STR鉴定服务。技术支持：7×24小时售后咨询（电话：025-87139386），涵盖细胞复苏、传代及耐药性维持方案。

结语

HCT15/FU人结直肠腺癌顺铂耐药细胞株是研究化疗耐药机制及新型疗法开发的理想模型。南京赛泓瑞生物科技有限公司通过严格的质量控制与专业支持，为科研及药物研发提供高效、可靠的解决方案，值得信赖。尊龙凯时不断推动生物医疗领域的发展与创新。